毛細管電泳儀進樣技術要達到标準需要滿足的條件
毛細管電泳儀采用并行毛細管電泳（CE）與熒光檢測技術相結合，能夠對DNA和RNA電泳分(fēn)離(lí)檢測。毛細管列陣是并行毛細管電泳的基礎，根據毛細管列陣的毛細管數量分(fēn)爲96和12通道，每個毛細管首先注入可導電的分(fēn)離(lí)膠，然後對毛細管兩端施加電場，96孔闆中(zhōng)的預檢測樣品開(kāi)始毛細管電泳。依據核酸片段長度不同在凝膠電泳中(zhōng)遷移速度不同的原理核酸樣品被分(fēn)離(lí)檢測。
毛細管電泳儀分(fēn)析對進樣技術要求很高，進樣操作事項如下(xià)：
一(yī)、進樣區帶越小(xiǎo)越好：
無論采用何種進樣方式，毛細管插入樣品溶液的深度一(yī)般要少于毛細管總長度的1%～2%，以盡量減少樣品溶液經毛細吸附進入毛細管而影響進樣量的性。樣品管中(zhōng)溶液少爲5μL，進樣體(tǐ)積爲1～50nL。
二、進樣時間以短爲宜：
通常進樣時間爲0.5～1s，此時毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體(tǐ)積可忽略不計。
雖然毛細管電泳的進樣時間可至±0.1s，但由于毛細管插入樣品管時不可避免地會粘附一(yī)些溶液，進樣時間過短會影響分(fēn)析的重複性。
三、樣品預濃縮：
受毛細管電泳儀毛細管内總體(tǐ)積的制約，對于濃度很稀的樣品，毛細管電泳不能象HPLC那樣可加大(dà)進樣量來提高檢測靈敏度，但可采取一(yī)些措施來改善。
1、當樣品緩沖液的電導明顯低于（100倍以上）電泳緩沖液時，毛細管兩端加上電壓後可在樣品區帶前後形成一(yī)個更大(dà)的電場，使樣品溶液中(zhōng)的分(fēn)子遷移的更快。當這些分(fēn)子到達電泳緩沖液邊界時，由于電場減弱，遷移速度減慢(màn)，使樣品區帶由寬變窄，濃度提高，而達到濃縮的目的。
2、當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導一(yī)樣，而樣品濃度較稀，不适合再作稀釋時，可在進樣前先吸入一(yī)些水，也能達到濃縮的目的。
無論采取何種進樣方式，上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區帶電勢陡降，會導緻此區帶溫度升高。
四、毛細管插入樣品溶液後，應立即開(kāi)始進樣操作，完成後迅速移至緩沖液中(zhōng)開(kāi)始電泳。否則會産生(shēng)毛細作用和虹吸現象，引起誤差并使譜帶展寬。
五、電極不要和毛細管接觸，樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應保持平衡。
六、使系統盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度，而影響進樣量的恒定。
七、樣品溶液中(zhōng)的溶劑必須與緩沖液互溶，前者的離(lí)子強度應低于後者。
八、防止樣品溶液和緩沖液蒸發、損耗。
微信掃一(yī)掃
