分(fēn)析毛細管電泳儀的進樣操作事項

更新時間:2021-08-26      點擊次數:1399
   毛細管電泳儀是以毛細管爲分(fēn)離(lí)通道,以高壓直流電場爲驅動力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分(fēn)配系數差異進行分(fēn)離(lí),是分(fēn)析科學繼液相色譜儀之後的又(yòu)一(yī)重大(dà)進展,使分(fēn)析科學從微升級進入到了納升級水平,不僅使單細胞乃至單分(fēn)子分(fēn)析成爲可能,也使蛋白(bái)質和核酸等生(shēng)物(wù)大(dà)分(fēn)子分(fēn)析有了新的轉機。
  毛細管電泳儀分(fēn)析對進樣技術要求很高,進樣操作事項如下(xià)。
  一(yī)、進樣區帶越小(xiǎo)越好:
  無論采用何種進樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一(yī)般要少于毛細管總長度,以盡量減少樣品溶液經毛細吸附進入毛細管而影響進樣量的性。
  二、進樣時間以短爲宜:
  通常進樣時間,此時毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體(tǐ)積可忽略不計。
  雖然毛細管電泳的進樣時間可,但由于毛細管插入樣品管時不可避免地會粘附一(yī)些溶液,進樣時間過短會影響分(fēn)析的重複性。
  三、樣品預濃縮:
  受毛細管内總體(tǐ)積的制約,對于濃度很稀的樣品,毛細管電泳不能象HPLC那樣可加大(dà)進樣量來提高檢測靈敏度,但可采取一(yī)些措施來改善。
  1、當樣品緩沖液的電導明顯低于電泳緩沖液時,毛細管兩端加上電壓後可在樣品區帶前後形成一(yī)個更大(dà)的電場,使樣品溶液中(zhōng)的分(fēn)子遷移的更快。當這些分(fēn)子到達電泳緩沖液邊界時,由于電場減弱,遷移速度減慢(màn),使樣品區帶由寬變窄,濃度提高,而達到濃縮的目的。
  2、當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導一(yī)樣,而樣品濃度較稀,不适合再作稀釋時,可在進樣前先吸入一(yī)些水,也能達到濃縮的目的。
  無論采取何種進樣方式,上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區帶電勢陡降,會導緻此區帶溫度升高。
  四、毛細管插入樣品溶液後,應立即開(kāi)始進樣操作,完成後迅速移至緩沖液中(zhōng)開(kāi)始電泳。否則會産生(shēng)毛細作用和虹吸現象,引起誤差并使譜帶展寬。
  五、電極不要和毛細管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應保持平衡。
  六、使系統盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進樣量的恒定。
  七、樣品溶液中(zhōng)的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離(lí)子強度應低于後者。
  八、防止樣品溶液和緩沖液蒸發、損耗。
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